尊龙凯时细胞培养条件包括气相组成：95%空气与5%二氧化碳，培养温度为37℃。为了获得最佳的细胞生长环境，建议在培养情况下添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。该细胞系来源于一位58岁白人男性肺癌患者的组织移植，经过DJGriad的培养建立。

A549细胞可通过胞苷二磷酸胆碱途径合成不饱和脂肪酸含量较高的卵磷脂。传代时，首次建议采用1:2的比例进行传代。传代后，通过2天更换培养基以维持细胞活性。

收到尊龙凯时细胞后，建议将其处理至良好状态，再灌满完全培养液并妥善封闭瓶口以确保运输安全。细胞到达后，可使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行无菌操作。随后，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以使细胞状态稳定，之后再进行处理。

确认细胞状态的过程中，可以通过显微镜观察细胞的生长情况，并进行不同倍数的拍照存档（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将是售后服务的重要依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

尊龙凯时细胞传代的步骤如下：

a. 细胞传代：

在细胞未超过80%汇合度时，收集瓶装的完全培养液至离心管中，留5ml完全培养基，并继续放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代培养。对于贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 丢弃培养上清，使用不含钙、镁的PBS缓冲液洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。通过显微镜观察消化情况，如果细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加入5ml完全培养基终止消化过程。
3. 轻轻吹打悬浮细胞，使之完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代：

1. 采用半换液法：竖直放置培养瓶静置1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基。如培养基变色较慢，可直接加入约500ul FBS。传代时可直接补充5ml培养基，分至两个培养瓶，通常经过3次后可进行一次离心传代，去除死细胞。
2. 采用离心换液法：如需分瓶，收集细胞悬液至离心管中，在1000rpm下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml培养液重悬，随后按1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml配置好的新完全培养基，以维持细胞活力。在后续传代中，根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存和复苏

c. 细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次;
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟;
3. 弃去上清，加入1ml来自尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱保存，如果后期需转入液氮罐，需在-80℃冰箱保存24小时以上后再转移。

d. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2. 将冻存管中的细胞转至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟;
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养;
4. 第二天，更换新鲜完全培养基继续培养。

注意事项

在运输过程中，部分细胞可能粘附不牢，导致细胞脱落，这是正常现象。如脱落的细胞过多，可将所有培养液收集至离心管，500rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可进行对比）。对沉淀加入1-2ml胰酶，轻吹重悬，并在1-2分钟后加入5ml完全培养基终止消化，再次离心并重悬于1-2ml完全培养基中，然后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。