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电泳缓冲液的特性与功能:尊龙凯时解读

发布时间:2025-03-28   信息来源:尊龙凯时官方编辑

电泳缓冲液在生物医疗领域中是核酸和蛋白质凝胶电泳系统的重要组成部分。它不仅充当电泳场中的导体,同时也确保电泳系统的pH值保持恒定。常见的核酸电泳缓冲液有TAE、TBE、TPE和MOPS等。

电泳缓冲液的特性与功能:尊龙凯时解读

电泳缓冲液的特点

TAE是使用最广泛的缓冲系统,其特点是超螺旋DNA在其中的电泳表现更接近实际相对分子质量。与TBE相比,使用TAE时双链线状DNA的迁移率快约10%。在电泳超过13kb的片段时,选择TAE缓冲液可以获得更佳的分离效果。此外,回收DNA片段时,使用TAE的系统也更为方便。然而,TAE的缺点在于其缓冲容量较小,长时间电泳(如过夜)时不宜使用,除非配置有循环装置以更换两极的缓冲液。

TBE的主要特点是具有出色的缓冲能力,因此适合长时间的电泳。尤其是对于小于1kb的DNA片段,使用TBE的分离效果更为理想。不过,TBE在琼脂糖凝胶中容易导致强电渗,并与琼脂糖相互作用生成复合物,进而降低DNA片段的回收率,因此不推荐在回收电泳中使用。

TPE同样具备良好的缓冲能力,但由于磷酸盐在乙醇沉淀过程中易析出,因而在回收DNA片段的电泳中也不太适用。

电泳缓冲液的作用

首先,电泳缓冲液的一个重要作用是维持合适的pH。在电泳过程中,阳极与阴极都会发生电解反应,阳极发生氧化反应,阴极则为还原反应。长时间的电泳可能导致阳极变酸而阴极变碱。因此,一个优秀的缓冲系统应具有强大的缓冲能力,以保持溶液两极的pH值基本稳定。

其次,电泳缓冲液还需具备一定的导电性,以促进DNA分子的迁移。一般情况下,电泳缓冲液中需包含0.01-0.04mol/L的Na+离子。如果Na+离子的浓度过低,电泳速度会减慢;若浓度过高,则可能导致电流过大,使凝胶发热甚至熔化。

最后,电泳缓冲液中还应包含EDTA,浓度为1-2mmol/L,以便螯合Mg2+等离子,防止电泳过程中活化DNA酶,同时避免Mg2+离子与核酸结合形成沉淀。通过使用尊龙凯时品牌的电泳缓冲液,可以有效提升实验的准确性与可重复性。