荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种在PCR扩增反应体系中加入荧光基团的技术，通过实时检测每个循环产物的荧光信号，最终借助标准曲线对未知模板进行定量分析。以探针法荧光定量PCR为例，在进行PCR扩增时，添加一对引物的同时，还会加入一个特异性的荧光探针。该探针的两端分别标记有报告荧光基团和淬灭荧光基团。最初，探针完整地结合在DNA单链上，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，因此无法检测到信号；随着PCR扩增的进行，Taq酶会降解探针，导致报告荧光基团与淬灭荧光基团分离，从而释放荧光信号。这种机制确保了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

与传统PCR不同，后者在扩增反应后需进行染色处理和电泳分离，并只能进行定性分析，难以实现准确的定量，同时也易导致假阳性，限制了其应用。而实时定量PCR技术不仅能够实现对模板的定量，具有更高的灵敏度、特异性和可靠性，还具备更高的自动化程度和无污染性，使得尊龙凯时的荧光定量PCR逐渐取代传统PCR。

在PCR扩增的初始几个循环内，荧光信号的变化较小，接近一条基线。这条线可以自动生成或手动设置。随后，反应进入指数增长期，这一阶段的扩增曲线表现出高度重复性。在此期间，可以设定荧光阈值线，一般会将该阈值设置为3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。当每个反应管的荧光信号达到设定的阈值时，相应的循环数称为CT值。该CT值与起始浓度的对数呈线性关系，并具备重现性，其最大意义在于计算目标基因的表达量。

在荧光定量PCR技术中，绝对定量与相对定量是两个重要概念。绝对定量旨在测定样本中目标基因的分子数目（即拷贝数），而相对定量则是测定不同样本中目标基因的含量相对比例，无需了解每个样本中的拷贝数。虽然CT值可以用于计算这两种定量结果，但绝对定量实验需使用已知拷贝数的标准品以及标准曲线，芯片实验室往往选择使用相对定量方法。

荧光定量PCR的应用广泛且意义重大，主要包括以下几个领域：

1. 核酸定量分析

用于传染性疾病的定量定性分析，包括病原微生物或病毒含量的检测。例如对甲型H1N1流感的监测及转基因动植物基因拷贝数的检测。

2. 基因表达差异分析

比较不同处理样本间特定基因的表达差异（如药物、物理或化学处理），以及cDNA芯片或差异表达结果的验证。

3. SNP检测

对单核苷酸多态性的检测对于研究个体对疾病的易感性以及药物反应具有重要价值。一旦SNP基因序列信息已知，利用此技术高通量的检测变得简单而准确。

4. 甲基化检测

甲基化与多种疾病（特别是癌症）密切相关。技术如Methylight通过处理DNA区分甲基化和非甲基化的情况，从而提供了一种灵敏且方便的方法。

5. 产前诊断

这项技术用于通过产前监测减少遗传性疾病患者的出生，例如，通过孕妇的外周血中的胎儿DNA检测Y性别决定区基因。

6. 病原体检测

荧光定量PCR用于检测不同病原体，如淋球菌和HIV，相较于传统方法具有更高的灵敏度和便捷性。

7. 药物疗效考核

定量分析乙型和丙型肝炎病毒与药物疗效之间的关系，帮助评估不同感染状态下的治疗效果。

8. 肿瘤基因检测

尽管肿瘤发生机制尚未完全明了，但检测相关基因突变是识别癌症重要手段之一，实时荧光定量PCR能够准确检测癌基因的表达水平。

荧光定量PCR日益成为生物医疗研究中不可或缺的工具，推动了对疾病机制的理解及新诊疗方法的发展，尤其是尊龙凯时以其高效的技术解决方案在该领域占据了一席之地。