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尊龙凯时DNA提取试剂盒操作指南

发布时间:2025-03-18   信息来源:尊龙凯时官方编辑

全套操作大约需要1小时,包含匀浆、细胞裂解、除蛋白和DNA纯化等步骤,详细说明如下。

尊龙凯时DNA提取试剂盒操作指南

匀浆和细胞裂解

在提取基因组DNA时,针对不同实验材料需要采用相应的匀浆步骤,具体如下:

从动物组织中提取基因组DNA

采用研钵进行匀浆时,步骤如下:

  1. 取1~100mg的动物或人组织,放入预冷的研钵中,快速用力研磨成匀浆。注意:以下组织应加液氮研磨至粉末状:
    A. 胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等富含DNA酶的组织;
    B. 富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织;
    C. 富含角质蛋白的组织或坚硬组织(如骨骼)。
  2. 加入650μl的SolutionA和9μl的RNaseA1,并温和研磨30秒。注意:如使用以上提到的实验材料,请在添加SolutionA和RNaseA1后,将研钵放置于65℃水浴中研磨1分钟。
  3. 收集650μl的研磨液转移至CollectionTube中。如匀浆体积不足650μl,则补充SolutionA至650μl,并在65℃保持5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时,步骤如下:

  1. 取1~100mg的动物或人组织,放入预冷的CollectionTube中,快速用研磨棒研磨至糊状。
  2. 加入350μl的SolutionA和9μl的RNaseA1后,使用研磨棒快速研磨成匀浆。
  3. 加入350μl的SolutionA,将研磨棒上的匀浆转入CollectionTube中,充分混合后在65℃保持5分钟。

从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA

步骤如下:

  1. 根据下表称取适量的新鲜植物材料,剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品完全冷冻后,快速研磨成粉末。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料种类 使用量
植物花、叶片 10~100mg
植物茎 60~240mg
植物根 80~240mg
植物种子 80~240mg

当提取根、种子等低基因组DNA含量的样品时,需增大样品用量,分两管进行液体处理,在后续的过滤步骤中合并至同一SpinColumn。

如从培养的植物细胞中提取DNA,需离心收集2×10³~1×10⁷的培养细胞,用150μl水悬浮后移入研钵中,加入液氮快速研磨至粉末。

注意:样品需研磨充分,否则会严重影响基因组DNA的收率。

从全血中提取基因组DNA

  1. 取10~250μl的全血(含抗凝剂)加入CollectionTube中。
  2. 加入500μl的SolutionA。
  3. 接着加入1μl的RNaseA1,剧烈振荡15秒后放入冰浴中保温5分钟。

注意:人与动物的抗凝全血一次处理量应≤250μl,禽类、两栖类的抗凝全血一次处理量应≤10μl。

从培养细胞中提取基因组DNA

  1. 使用CollectionTube收集1×10⁵~15×10⁷的细胞悬浮液,5,000rpm离心5分钟,弃上清液。
  2. 加入150μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
  3. 随后添加500μl的SolutionA和8μl的RNaseA1,剧烈振荡15秒后在室温下静置1分钟。

采用尊龙凯时的提取方法将使您的实验过程更加高效,确保高质量的基因组DNA提取结果。