尊龙凯时提供的蛙病毒探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-45000）专为快速检测蛙病毒而设计，适用于低温运输与保存，温度要求为-20℃，保质期为12个月。

产品特点

蛙病毒（Ranavirus）是能够在多种细胞培养基中增殖的病毒，能抑制感染细胞的大分子生物合成。其在细胞浆中的复制过程与痘病毒类似，但蛙病毒的核酸合成则既依赖于宿主细胞浆又依赖于宿主细胞核。此外，该病毒还可感染大多数昆虫，特别是幼虫，因此，对蛙病毒的快速和准确识别对预防和检疫工作意义重大。尊龙凯时的此款试剂盒具备以下特点：

• 即用型设计，用户仅需提供样品DNA模板。
• 引物与探针经过优化，灵敏度高。
• 附带阳性对照，便于区分假阴性样品。
• 高特异性设计，不会与其他微生物DNA交叉反应。
• 支持定性及定量检测，定量检测线性范围大于5个数量级。
• 可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
• 仅供科研使用。

成分及配方

试剂盒中包含：

• 2×Probe qPCR Magic Mix - 500μL
• 荧光PCR专用模板稀释液 - 1ml
• 纯净水 - 1ml
• 蛙病毒探针法qPCR引物-探针混合液 - 150μL
• 蛙病毒探针法qPCR阳性对照 (1×10⁷拷贝/μL) - 50μL
• 使用手册 - 1份

使用方法

一、稀释标准曲线样品

请在独立区域内进行稀释操作，以避免样品污染。由于标准品浓度较高，请务必注意防止交叉污染：

1. 标记6个离心管，分别标注为6、5、4、3、2、1。
2. 向每个管中加入45μL荧光PCR专用模板稀释液。
3. 在6号管中加入5μL阳性对照（浓度为1×10⁷拷贝/μL），充分震荡，得到1×10⁶拷贝/μL的标准样品，放冰上待用。
4. 重复上述操作，依次稀释直至获得6个标准曲线样品。

二、样品DNA的制备

1. 若需提取N个样品，建议准备N+2个提取液，额外的用于阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。
2. 对阳性对照进行1000倍稀释，量与待提取样品相同，使用水作阴性对照。
3. 用合适的方法纯化DNA，试剂盒可与普遍的DNA提取试剂兼容。

三、Probe qPCR反应（20μL体系）

1. 标记N+9个PCR管，其中N+2用于样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。
2. 按照以下配方，将成分加入标记的管中，然后盖好管盖。

四、数据处理

利用样品的Ct值，结合阳性对照的浓度，绘制标准曲线，推算出样品的核酸浓度。对于定性分析，确保阴性对照的Ct值≥40，阳性对照应显示显著的荧光增殖及典型扩增曲线。尊龙凯时始终致力于提供高质量的科研产品，以助力您的研究。