尊龙凯时提供的RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞培养指南旨在为科研人员提供一致和高效的细胞培养方法。以下是详细的细胞培养条件和步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： 1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 首次建议1:2传代，每2天换液。

备注： 用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡培养。如果对比培养效果不佳，建议购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待细胞培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口是最佳运输方案。

在细胞收到后，首先用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，放入超净台内进行无菌操作。然后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。接下来，通过显微镜观察细胞生长情况，并在不同倍数下拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞未达到80%汇合度时，将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，再放置于37℃、5%CO2孵箱培养。如果细胞密度已超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态。如果大部分细胞变圆并脱落，迅速处理，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上完全培养基停止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液并添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基结束消化，然后轻轻吹打细胞使之脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，并加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意防护），迅速置于37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在细胞运输过程中，一些细胞可能因贴壁不牢而发生脱落，属于正常现象。应根据以下方法处理：收集培养液至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养。随后，加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后，消化1-2分钟后再加5ml完全培养基停止消化。再次离心，弃上清，加入1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代。最后，将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1）关于细胞出现问题的重发情况及判定标准如下：

1. 如细胞在运输过程中遭遇问题（如丢失、瓶身破损或培养液漏液等），可以重发。
2. 若细胞污染问题需在收到产品48小时内提出真实的实验结果，核实后可重发。
3. 常温运输的细胞在静置24小时后或干冰运输的细胞在复苏后24小时未存活（需提供真实清晰的状态照片），可重发。
4. 若细胞在复苏后24小时未发生污染，可重发。
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提出真实实验结果，若通过台盼蓝染色法确认，则可重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，3天内未提交照片的视为产品合格。
7. 若在4-7天内出现问题需提供前三天照片、问题时照片及相关操作步骤，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任后可重发。

2）关于不予重发的情况：

1. 因客户造成的污染，不重发。
2. 因客户不正确操作导致的细胞状态不佳，不重发。
3. 非推荐的细胞培养体系造成的细胞状态不良，不重发。
4. 未提供前三天照片的状态不良不重发。
5. 经其他处理的细胞，不重发。
6. 收到后2天内未告知，不重发。
7. 依据具体情况而定。

通过尊龙凯时的细胞培养指南，您可以有效提升实验的成功率，确保细胞的健康状态。如有任何问题，欢迎与我们的技术团队联系。